HBV耐药背景资料：
    目前抗HBV药物主要包括核苷（酸）类似物和α干扰素。研究表明干扰素的疗效与A1762＋G1764位点的双变异密切相关。核苷（酸）类似物因具有服用方便、不良反应小、适应症广泛等特点而被广泛应用，但长期服用核苷（酸）类似物，有可能产生耐药性突变，从而导致病情反弹。本项检测涵盖了目前FDA批准用于治疗乙型肝炎的所有核苷（酸）类似物耐药性突变相关位点，对于指导临床合理用药，具有重要的参考价值。
    根据核苷类药物耐药变异株的不同形式,可将现有的药物分为三组:
  ① L-核苷类似物组：包括拉米夫定、恩曲他滨、替比夫定等；
  ② 无环磷酸酯组:包括阿德福韦和替诺福韦；
  ③ 环戊烯组: 包括恩替卡韦等。

● L-核苷类似物组的耐药特点与拉米夫定相似,主要变异位点集中于M204I/V,伴随有一些其他位点的变异，其耐药性突变形式主要有以下3种：
  ⑴　L180M＋M204V/I，　⑵ V/173L＋L180M＋M204V/I， ⑶ M204I。
● 无环磷酸酯组包括阿德福韦和替诺福韦，其中阿德福韦有两个主要的耐药性突变位点：N236T和A181V/T。
● 环戊烯组的代表药物是恩替卡韦，它具有很高的耐药基因屏障,需要3个（或3个以上）位点同时突变才能产生耐药性。在这3个位点中，包括2个拉米夫定耐药位点（L180M＋M204V/I），其它的突变位点还包括：I169T、T184G、S202I和M250V。
恩替卡韦耐药突变主要有2种形式： 
 ⑴L180M＋M204V/I＋M250V±I169T，　⑵L180M＋M204V/I＋T184G＋S202I

Pyrosequencing检测位点：

● I169T突变（恩替卡韦耐药相关）
● V173L突变 (拉米夫定和恩曲他滨耐药相关)
● L180M突变 (拉米夫定、替比夫定、恩曲他滨和恩替卡韦耐药相关)
● A181V/T突变 (阿德福韦耐药相关)
● T184G突变 (恩替卡韦耐药相关)
● A194T突变（替诺福韦耐药相关）
● S202I突变（恩替卡韦耐药相关）
● M204V/I突变（即YMDD突变，拉米夫定、替比夫定、恩曲他滨和恩替卡韦耐药相关）
● N236T突变 (阿德福韦耐药相关)
● M250V突变（恩替卡韦耐药相关）
● A1762＋G1764突变（干扰素疗效相关位点）

技术优势：

● 特异性的引物设计及优化的反应体系保证对低滴度样本的检测同样有效；
● 采用基于引物延伸的直接测序法，是突变检测的“金标准”（优于荧光PCR法）。
● 测序引物紧靠待测位点，最大限度降低了测序过程中引入突变的可能性（优于常规测序法）。
● 特有的基因频率分析，可准确获得病毒突变株的比例。

Pyrosequencing原理：

●DNA合成过程中，dNTP的渗入伴随着释放等量的PPi；
●PPi在Sulfurylase和Luciferase的作用于形成光信号；
●残留的dNTP和ATP在Apyrase作用下降解；
●按特定的顺序依次加入不同dNTP, 根据捕获的光信号确定

待测位点/区域的序列信息。
实验流程：
 

样本要求：
由客户提供血清样本(500ul)，样品裂解、PCR扩增及SNP检测均由本公司完成。
实验结果：
本公司为客户提供Pyrosequencing检测原始图谱和耐药性突变检测结果。